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ampu314

新虫 (初入文坛)

[交流] 诚意询问,为什么蛋白能表达出来但酶活测不出来?

我的一段基因序列已成功连在PET-29a上转入BL21中能表达出来,(跑SDS-PAGE),但总是测不出酶活性,这是什么原因。我使用PH=8.0的0.01M的TRIS-HCL重悬菌液后压榨破碎的,有什么原因呢,实在想不通,谢谢!
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-23 22:52
这个再正常不过了
很多酶表达后是没有活性的
如果没有复性问题,那现在市场上的生物工程药物价格不知道会降多少
尤其是包涵体形式的
主要原因当然是分子没有正确的折叠 形成具有复杂精准的高级结构!
其他,诸如反应条件或者基因突变均有可能!
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-06-23 22:30:34
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erping80

新虫 (小有名气)

加去垢剂如何?
3楼2009-06-24 08:40:38
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
好好查查包涵体的变性复性吧:)
金币是赌出来的
4楼2009-06-24 09:29:08
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是包涵体表达的。

另,注意你自己的酶天然的反应条件 与你的测定条件 组分上的差别。
例如,有没有辅基给忘掉了?
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-06-24 09:35:42
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

啥叫压榨破碎啊?

你冰浴超声破碎试试。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-06-24 09:38:44
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yanlili

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的蛋白纯化了吗?即使不是形成包含体,并且纯化出来了也是可能没活性的,可能是你的前面的标签太大,影响了它的活性
7楼2009-06-24 09:57:46
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bioinflab

银虫 (小有名气)

还有一种可能酶原问题
8楼2009-06-24 10:05:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以先用去垢剂变性,然后在复性.复性可以买试剂盒的.refolding KIT
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2009-06-24 13:14:26
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个在再常不过了。

可能是没失去了活性。或者反应体系不合适。
10楼2009-06-24 13:52:46
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