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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 诚意询问，为什么蛋白能表达出来但酶活测不出来？
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ampu314

新虫 (初入文坛)

[交流] 诚意询问，为什么蛋白能表达出来但酶活测不出来？

我的一段基因序列已成功连在PET-29a上转入BL21中能表达出来，（跑SDS-PAGE),但总是测不出酶活性，这是什么原因。我使用PH=8.0的0.01M的TRIS-HCL重悬菌液后压榨破碎的，有什么原因呢，实在想不通，谢谢！
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1楼 2009-06-23 22:23:54
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-23 22:52
这个再正常不过了
很多酶表达后是没有活性的
如果没有复性问题，那现在市场上的生物工程药物价格不知道会降多少
尤其是包涵体形式的
主要原因当然是分子没有正确的折叠 形成具有复杂精准的高级结构！
其他，诸如反应条件或者基因突变均有可能！
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-06-23 22:30:34
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erping80

新虫 (小有名气)
加去垢剂如何？
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3楼2009-06-24 08:40:38
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
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好好查查包涵体的变性复性吧：）
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金币是赌出来的
4楼2009-06-24 09:29:08
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是包涵体表达的。

另，注意你自己的酶天然的反应条件 与你的测定条件 组分上的差别。
例如，有没有辅基给忘掉了？
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-06-24 09:35:42
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
啥叫压榨破碎啊？

你冰浴超声破碎试试。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-06-24 09:38:44
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yanlili

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的蛋白纯化了吗？即使不是形成包含体，并且纯化出来了也是可能没活性的，可能是你的前面的标签太大，影响了它的活性
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7楼2009-06-24 09:57:46
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bioinflab

银虫 (小有名气)
还有一种可能酶原问题
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8楼2009-06-24 10:05:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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可以先用去垢剂变性,然后在复性.复性可以买试剂盒的.refolding KIT
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2009-06-24 13:14:26
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个在再常不过了。

可能是没失去了活性。或者反应体系不合适。
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10楼2009-06-24 13:52:46
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