24小时热门版块排行榜    

查看: 1675  |  回复: 22
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] PCR目的条带比较微弱?(附图)

PCR目的条带比较微弱,最有可能是哪个地方出现问题呢?我的反应体系(20ul)及条件如下:
10×buffer    2ul
F引物      0.4ul
R引物      0.4ul
dNTP            0.4ul
Taq酶       0.3ul
模版        2ul
ddH2O          14.5ul

94°预变性5min,94° 50s
                           64° 30s
                           72° 1min     
最后72°延伸10min,一共35个循环.电泳图如下,请大家帮我分析分析,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanlili

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是退火温度比较高,特异性好,但相应的产物的量会减少
5楼2009-06-23 10:17:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是你的目的基因表达量低,你可以再跑一次巢式PCR,看看结果是怎么样的。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-06-22 16:07:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道你是为了检测还是为了回收?检测就够用了。如果回收,就用pcr产物再做一次pcr,然后胶回收,目的片段
3楼2009-06-22 16:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weilin2378

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以试一试降低退火温度。如果还不行,可以减少模板DNA,试一下0.5微升,因为模板浓度太高也可能抑制PCR反应。
4楼2009-06-22 20:29:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 材料学硕,求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 7/350 2026-03-24 17:11 by hello七七
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123!
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
信息提示
请填处理意见