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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】色谱基线出现锯齿状,该怎么办?
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】色谱基线出现锯齿状,该怎么办?

最近在采用凝胶色谱检测生物大分子时,遇到一个非常棘手的问题,不知道该如何解决,希望各位高手能指点迷津、帮忙解决，不胜感激！

具体问题:
凝胶色谱柱：WATERS WAT011535（ultrahydrogelTM 1000，7.8X300mm）
流动相：10mM PB（pH 8.4）
流速：0.3ml/min
待检样品：多糖（分子量300KD）
温度：30

现象：
在流速0.3ml/min时平衡柱子时，基线很难平衡（非锯齿状），于是将流速调至0.5ml/min，基线快速达到平稳，于是再将流速调回到0.3ml/min是，基线出现锯齿状、波动及大，平衡很久，基线仍然无法平直。这会是什么问题，该如何解决啊？
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1楼 2009-06-20 09:54:38
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jane291

金虫 (小有名气)
★ ★
wingcat(金币+1,VIP+0):谢谢 6-20 17:39
zhaojunji06(金币+1,VIP+0): 6-24 13:41
不知楼主机器上的锯齿状基线有没有规律啊?比如说每两分钟走一个之类的,估计是进气泡了,在废液口抽一下吧~~~
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2楼2009-06-20 12:12:55
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liuke009

铁杆木虫 (著名写手)
★
wingcat(金币+1,VIP+0):谢谢 6-20 17:40
可能是进气泡了，冲洗一下看看行不行
如果还不行，就打电话给仪器工程师处理吧
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3楼2009-06-20 13:05:02
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yjywei

木虫 (著名写手)
★
wingcat(金币+1):谢谢
锯齿状波动多大mv？一般噪声为0.002mv  在高10倍也算正常
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4楼2009-06-20 13:56:39
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sunli0808

★
jsys(金币+1,VIP+0):感谢参与！ 6-21 10:37
可能进气跑了。引起基线不稳
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5楼2009-06-20 13:59:52
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
★ ★
wingcat(金币+2):谢谢
这个问题是只出现了今天这一次呢，还是每天你都是这个程序，每天都这样？如果只是今天出现这一次，正如楼上所说，很有可能是系统进气泡；如果每天都这样，我觉得是仪器出了问题，你用这样的流动相系统压力多少，我估计液相泵的密封圈不是很好了，很有可能有点漏液，或者漏气，也有可能系统某个部位或者整个系统很脏了，建议首先清洗下系统看看，然后在检查下泵处是不是有问题
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我为新生
6楼2009-06-20 14:32:15
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)
谢谢各位的建议！
流速0.3ml/min，基线呈现规律性锯齿状，上下波动达到30mv；当流速调到0.5ml/min时，基线平直。连接RP柱，采用相同的色谱条件，谱图未出现此现象，基线平直。怎么来解决这个问题啊？
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7楼2009-06-20 14:39:01
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
★
jsys(金币+1,VIP+0):感谢参与！ 6-21 10:37
引用回帖:
Originally posted by zhaojunji06 at 2009-6-20 14:39:
谢谢各位的建议！
流速0.3ml/min，基线呈现规律性锯齿状，上下波动达到30mv；当流速调到0.5ml/min时，基线平直。连接RP柱，采用相同的色谱条件，谱图未出现此现象，基线平直。怎么来解决这个问题啊？

是不是阻尼器有点问题呢？0.3流速与0.5流速除了压力就是输压频率不一样了！！
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我为新生
8楼2009-06-20 14:49:53
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)
非常感谢 happy169！
不知能否加上我的MSN（zhaojunji06@hotmail.com），详细向你请教下？
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9楼2009-06-20 15:32:44
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)
只是在使用waters柱子，在流速0.3ml/min的条件下才会出现锯齿状.
如果是仪器体系的问题的话，我们在采用流通管代替柱子时，其他色谱条件不变，基线平直.出现特异情况后,采用RP-色谱柱时，流速1.0，仪器运行正常。应该可以排除泵或检测器中气泡的影响.
由于流速较低,正常状况下系统泵压为78,现在的泵压不稳(从0变成78,再从78变成0),呈现规律性的变化.
不知道有没有哪位遇到过同样的问题?
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10楼2009-06-20 15:56:31
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