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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SOS质粒电泳跑成这个样子？？？？？？
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汪汪秀

金虫 (正式写手)

[交流] SOS质粒电泳跑成这个样子？？？？？？

大肠杆菌DH5α质粒有6条带。。。
奇怪
方法是碱裂解法
加SOLUTION2时没有超过三分钟
也没有剧烈震荡
大家帮我解决一下啊。。。。
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返璞归真
1楼 2009-06-19 15:22:22
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yanlili

金虫 (正式写手)
★
汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-23 14:16
你这个情况我也遇到过。我听说了2种说法，一是多聚体，所以又很大的条带。你的质粒浓度很大啊，我觉得没有污染，做个单酶切一看便知，我也遇到过当时以为污染了，结果单切只有一个条带。另一种说法是由于特定的基因序列造成的不同程度的超螺旋，所以比一般的多。你再提的时候最后溶解用的水加多点，你会发现条带会变少的。相信自己，先不要否定自己，祝你好运，加油
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22楼2009-06-23 10:46:40
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
前面的四条小带很诡异！RNA也够亮的
是不是菌液不纯啊 有多种质粒？
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-06-19 15:41:17
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dsslnn

铜虫 (初入文坛)
★
汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
先证明是不是一个质粒，选择在这个质粒上有一个位点的内切酶，单切一下，看最后是不是一条带，就能证明是不是一个质粒了啊！
如果证明是一个质粒，那么6条带，可能包括双螺旋，开环，线性，还有就是复制中的质粒，还没有分开就被你提出来了（个人觉得如果是一个质粒的话，只能这么解释）。
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3楼2009-06-19 15:45:19
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
跑电泳时点一个lambdaDNA-HindIII酶切产物做marker。用单酶切点酶切一下，就知道是不是目的质粒了。最下边可能是rna。我建议你用试剂盒提，就不会这么麻烦了。
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4楼2009-06-19 15:53:30
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