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汪汪秀

金虫 (正式写手)

[交流] SOS质粒电泳跑成这个样子??????

大肠杆菌DH5α质粒有6条带。。。
奇怪
方法是碱裂解法
加SOLUTION2时没有超过三分钟
也没有剧烈震荡
大家帮我解决一下啊。。。。
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返璞归真
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yanlili

金虫 (正式写手)



汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-23 14:16
你这个情况我也遇到过。我听说了2种说法,一是多聚体,所以又很大的条带。你的质粒浓度很大啊,我觉得没有污染,做个单酶切一看便知,我也遇到过当时以为污染了,结果单切只有一个条带。另一种说法是由于特定的基因序列造成的不同程度的超螺旋,所以比一般的多。你再提的时候最后溶解用的水加多点,你会发现条带会变少的。相信自己,先不要否定自己,祝你好运,加油
22楼2009-06-23 10:46:40
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
前面的四条小带很诡异!RNA也够亮的
是不是菌液不纯啊 有多种质粒?
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-06-19 15:41:17
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dsslnn

铜虫 (初入文坛)


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
先证明是不是一个质粒,选择在这个质粒上有一个位点的内切酶,单切一下,看最后是不是一条带,就能证明是不是一个质粒了啊!
如果证明是一个质粒,那么6条带,可能包括双螺旋,开环,线性,还有就是复制中的质粒,还没有分开就被你提出来了(个人觉得如果是一个质粒的话,只能这么解释)。
3楼2009-06-19 15:45:19
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
跑电泳时点一个lambdaDNA-HindIII酶切产物做marker。用单酶切点酶切一下,就知道是不是目的质粒了。最下边可能是rna。我建议你用试剂盒提,就不会这么麻烦了。
4楼2009-06-19 15:53:30
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