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汪汪秀

金虫 (正式写手)

[交流] SOS质粒电泳跑成这个样子??????

大肠杆菌DH5α质粒有6条带。。。
奇怪
方法是碱裂解法
加SOLUTION2时没有超过三分钟
也没有剧烈震荡
大家帮我解决一下啊。。。。
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返璞归真
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houjinglhy

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汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
前面的四条小带很诡异!RNA也够亮的
是不是菌液不纯啊 有多种质粒?
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-06-19 15:41:17
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dsslnn

铜虫 (初入文坛)


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
先证明是不是一个质粒,选择在这个质粒上有一个位点的内切酶,单切一下,看最后是不是一条带,就能证明是不是一个质粒了啊!
如果证明是一个质粒,那么6条带,可能包括双螺旋,开环,线性,还有就是复制中的质粒,还没有分开就被你提出来了(个人觉得如果是一个质粒的话,只能这么解释)。
3楼2009-06-19 15:45:19
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-19 15:59
跑电泳时点一个lambdaDNA-HindIII酶切产物做marker。用单酶切点酶切一下,就知道是不是目的质粒了。最下边可能是rna。我建议你用试剂盒提,就不会这么麻烦了。
4楼2009-06-19 15:53:30
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汪汪秀

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 汪汪秀 at 2009-6-19 15:22:
大肠杆菌DH5α质粒有6条带。。。
奇怪
方法是碱裂解法
加SOLUTION2时没有超过三分钟
也没有剧烈震荡
大家帮我解决一下啊。。。。

RNA酶37°温浴半个小时了
不是RNA
我感觉如果只是出现前面三条带那就正确了
返璞归真
5楼2009-06-19 15:55:08
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汪汪秀

金虫 (正式写手)

但是如果用试剂盒提的话,没有那么多杂带
返璞归真
6楼2009-06-19 15:56:46
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汪汪秀

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 汪汪秀 at 2009-6-19 15:22:
大肠杆菌DH5α质粒有6条带。。。
奇怪
方法是碱裂解法
加SOLUTION2时没有超过三分钟
也没有剧烈震荡
大家帮我解决一下啊。。。。

四条带可能的解释是什么呢??
返璞归真
7楼2009-06-19 15:59:14
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anik

银虫 (正式写手)


汪汪秀(金币+1,VIP+0): 6-20 22:09
RNaseA没有消化好。下面亮的条带都是RNA
8楼2009-06-19 18:15:58
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汪汪秀

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 汪汪秀 at 2009-6-19 15:59:

四条带可能的解释是什么呢??

那么点样空附近的带又怎么解释呢???
返璞归真
9楼2009-06-20 22:10:31
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林祎

木虫 (正式写手)

RNA酶没有处理好吧
10楼2009-06-21 00:04:58
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