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zbl0413

铜虫 (初入文坛)

[交流] 细胞转染问题

我是学化学的,生物方面的东西不是很懂,我们想用自己合成的东西将pEGFP转染到细胞中,但是几次都是失败的,操作步骤就是按照文献上讲的很一般的步骤,想请高手帮忙分析一下原因。用到的细胞是Hela细胞,这种细胞是不是最好转染的细胞?质粒是不是每孔(96孔板)保证量是1微克就是合适的?用到的转染试剂和质粒的混合比例在转染时是不是很重要?如果EGFP在细胞中表达,是不是荧光显微镜下就可以很清楚的看到,整个细胞都发荧光吗?希望高手帮忙啊
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yang0071

木虫 (职业作家)


zbl0413(金币+1,VIP+0): 6-21 09:49
1  hela转染还可以,不是最好转的,293t比它好转
2  96孔板转一ug太多了,6孔板1ug差不多
3  比例很重要,转染试剂说明书上有
4  可以清楚看见,整个都发荧光
5楼2009-06-18 14:55:08
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

你用293细胞去转吧,这个比Hela好转多了
3楼2009-06-17 16:29:54
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jdklgjldg

木虫 (正式写手)


zbl0413(金币+1,VIP+0): 6-22 16:13
你用什么转然试剂?不同细胞要求的转然试剂是不一样的。hela应该是脂质体2000就可以。具体比例应该是质粒:脂质体=1:1.5~1:2.
我的目标:诺贝尔医学与生理学奖
4楼2009-06-17 17:44:33
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zbl0413

铜虫 (初入文坛)

我用的是自己合成的东西做转染试剂,上面带有氨基,就有正电荷,而质粒上带负电荷,文献上讲(+/-)比例在转染的时候很关键,但是我怎么能知道它的正负电荷的数量,比例该如何确定呢?急求,请高手帮忙!!!!!!!
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6楼2009-06-22 16:17:27
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