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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞转染问题
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zbl0413

铜虫 (初入文坛)

[交流] 细胞转染问题

我是学化学的，生物方面的东西不是很懂，我们想用自己合成的东西将pEGFP转染到细胞中，但是几次都是失败的，操作步骤就是按照文献上讲的很一般的步骤，想请高手帮忙分析一下原因。用到的细胞是Hela细胞，这种细胞是不是最好转染的细胞？质粒是不是每孔（96孔板）保证量是1微克就是合适的？用到的转染试剂和质粒的混合比例在转染时是不是很重要？如果EGFP在细胞中表达，是不是荧光显微镜下就可以很清楚的看到，整个细胞都发荧光吗？希望高手帮忙啊
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交流经验，共同进步
1楼 2009-06-17 15:46:28
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jdklgjldg

木虫 (正式写手)
★
zbl0413(金币+1,VIP+0): 6-22 16:13
你用什么转然试剂？不同细胞要求的转然试剂是不一样的。hela应该是脂质体2000就可以。具体比例应该是质粒：脂质体=1：1.5~1：2.
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我的目标:诺贝尔医学与生理学奖
4楼2009-06-17 17:44:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
你用293细胞去转吧，这个比Hela好转多了
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3楼2009-06-17 16:29:54
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
zbl0413(金币+1,VIP+0): 6-21 09:49
1  hela转染还可以，不是最好转的，293t比它好转
2  96孔板转一ug太多了，6孔板1ug差不多
3  比例很重要，转染试剂说明书上有
4  可以清楚看见，整个都发荧光
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5楼2009-06-18 14:55:08
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zbl0413

铜虫 (初入文坛)
我用的是自己合成的东西做转染试剂，上面带有氨基，就有正电荷，而质粒上带负电荷，文献上讲（+/-）比例在转染的时候很关键，但是我怎么能知道它的正负电荷的数量，比例该如何确定呢？急求，请高手帮忙！！！！！！！
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交流经验，共同进步
6楼2009-06-22 16:17:27
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