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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物TA克隆后检测是用原来PCR的引物吗
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li_wyman

金虫 (小有名气)

[交流] PCR产物TA克隆后检测是用原来PCR的引物吗

PCR产物TA克隆后检测是用原来PCR的引物吗？我用全式金的克隆试剂盒，没有蓝斑，全是白斑对吗？今天我挑了10个单菌落，用20 ul ddH2O 悬浮，取2 ul 用原来PCR的引物检测没有一个阳性。
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1楼 2009-06-16 18:27:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
可以用原来的引物
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2楼2009-06-16 18:39:25
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该做菌落pcr，如果是puc系列载体，用M13引物作pcr
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3楼2009-06-16 18:49:58
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li_wyman

金虫 (小有名气)
原来的引物 也应该扩出来吧
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4楼2009-06-16 19:38:37
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有的时候用原来的引物扩增效果不好，我当初建16SrRNA库的时候，最开始测序给他们我自己的引物，结果说测不出来，后来采用M13测的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-06-17 17:38:35
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菊花茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
当然可以，全是白班是对的，如果加其它试剂才能出现蓝斑
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6楼2009-06-17 17:43:04
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

自己的引物完全可以啊

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
自己的引物完全可以；全是白斑也很正常，我们多的TA克隆也经常全是白斑，菌批后基本全是阳性~~~
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7楼2009-06-17 21:24:34
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好用M13的序列如下
M13 forward        5‘ GTAAAACGACGGCCAG3’
M13 reverse          5'- CAGGAAACAGCTATGAC
我们经常用来做菌液或菌落PCR省时省力
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8楼2009-06-18 12:40:15
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漆腥瞅宠

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2009-06-18 13:03:47
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)
做菌落PCR看看嘛~~~
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long,longlong.
10楼2009-06-18 13:35:27
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