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caiqingchong木虫 (著名写手)
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[交流]
还是基因敲除的问题（？？？）
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现在构建一个敲除载体，用的是psup202，因为实在是没有合适的抗性标记可以再用了，因为菌株已经可以抗卡那霉素，而且需要转进去另一个抗性的质粒。 如图:我在AMP抗性基因内插入了要敲除基因的一段序列，然后在这段序列里面单切后又插入了AMP抗性基因（原来载体上的AMP插入失活了，再另插入这个基因，就又可以做筛选标记了，就是这么想的。注：没有别的抗性基因可选了。）。可是现在是每当连接新的amp基因后，总能转化出部分菌落，在amp抗性下长的很好，可提取质粒后大小完全不对，比预想的要小很多，这是怎么回事呢，难道，连接进去的amp基因把我连接到载体上的要敲除的基因序列给置换下来了吗，应该不会的吧？ 大家分析下到底是怎么回事呢？ |
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5楼2009-06-21 19:00:01
caiqingchong
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4楼2009-06-18 11:09:16