24小时热门版块排行榜    

查看: 578  |  回复: 4
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 还是基因敲除的问题(???)

现在构建一个敲除载体,用的是psup202,因为实在是没有合适的抗性标记可以再用了,因为菌株已经可以抗卡那霉素,而且需要转进去另一个抗性的质粒。

如图:我在AMP抗性基因内插入了要敲除基因的一段序列,然后在这段序列里面单切后又插入了AMP抗性基因(原来载体上的AMP插入失活了,再另插入这个基因,就又可以做筛选标记了,就是这么想的。注:没有别的抗性基因可选了。)。可是现在是每当连接新的amp基因后,总能转化出部分菌落,在amp抗性下长的很好,可提取质粒后大小完全不对,比预想的要小很多,这是怎么回事呢,难道,连接进去的amp基因把我连接到载体上的要敲除的基因序列给置换下来了吗,应该不会的吧?

大家分析下到底是怎么回事呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在AMP抗性基因内插入了要敲除基因的一段序列,然后在这段序列里面单切后又插入了AMP抗性基因?
还是不清楚你的思路...插入型敲除还是双交换?

[ Last edited by 克隆大虾 on 2009-6-18 at 04:13 ]
4楼2009-06-18 11:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

caiqingchong

木虫 (著名写手)

没人做过类似的吗?
2楼2009-06-18 09:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

我也做敲除,但是你的这个也还是不太明白,按理说应该会按你所设计的那样,但是结果截然相反我也不太清楚!
3楼2009-06-18 11:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingl0087

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
"比预想的要小很多",是小了又插入的AMP基因吗?我也是最近才学习基因敲除,建议换个片段去插入失活原来的amp抗性基因。
5楼2009-06-21 19:00:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见