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晨曦CXL至尊木虫 (文坛精英)
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[交流]
关于相对荧光定量1×的定义的困惑
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我最近在做相对荧光定量，探究1种病毒单独感染和2病毒共同感染，对细胞内细胞凋亡因子表达量的影响，病毒感染细胞后，需要分不同时间点收取细胞。参考了一些文献，多数人是用0小时未感染病毒细胞内目的mRNA的量定义为1×，就是感染病毒的细胞，不同时间点收集的样品，都以此为参照，算出凋亡因子的相对表达量(但每个时间点的阴性对照，细胞内的凋亡因子量也会随着时间发生变化，上调或者下调，那么最终出来的数据，做出柱状图，怎么就能判断是病毒造成的影响呢，而不是细胞的自然凋亡？看到别人做的柱状图，没有把每个时间点阴性对照凋亡因子的表达变化量做进去。这样能说明问题吗)。还有另一种方法，就是按不同时间点处理数据，就是每个时间点都有一个阴性对照，把它的相关凋亡因子的量定义为1×，把感染组与它比较，最后再把不同时间点的数据汇集到一起，比较随着时间变化，相关凋亡因子表达量的变化。(但这样也存在一个问题，就是每个时间点阴性对照凋亡因子mRNA的表达量是不一致的，最后把不同时间点数据汇总比较是有问题的，因为不同时间点定义1×的标准不一样)所以现在比较纠结，不知道拿哪个时间点的阴性对照相关凋亡因子表达量定义为1×？？？？麻烦，知道的大佬点播一下。 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2020-01-06 22:21:13
晨曦CXL
至尊木虫 (文坛精英)
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我说的不同时间点汇总，意思是每个时间点的阴性对照都定义为1×，每个时间点的感染组都会得出来一个相对表达量(RQ)的值，然后把每个时间点的处理组的RQ值汇总，做柱状图，比较大小，看随着时间变化，基因表达量的变化。但这样比是有问题的，因为每个时间点定义为1×的值的标准也不一样(阴性对照组相关基因也是会随时间发生变化的)，所以最后汇总比较RQ值的大小，这个“大小”其实是不能说明问题的。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2020-01-07 10:45:18