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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录后基因P不出来
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张宏竹NJAU

新虫 (初入文坛)

[求助] 反转录后基因P不出来 已有2人参与

请教各位大神，我最近在做荧光定量PCR，基因是FOXA2，提取的RNA质量都很好，设计了好几对引物，溶解曲线都是乱的，产物跑胶验证也都没有条带，用高保真酶也p不出来，但是管家基因和其他几个基因都是正常的，恳请大神们帮帮忙，感激不尽

试剂：反转录用的是诺唯赞的P223（去除了基因组DNA），荧光定量用的是诺唯赞的P312，细胞是牛的原代肝脏细胞
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1楼 2020-01-05 17:30:24
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等你的时候

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是样本该目的基因不表达，  可考虑更换样本试试
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5楼2020-05-21 23:19:22
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用细胞基因为模板能不能P出来？会不会是你设计的引物在内含子/外显子区域，真核生物反转录是不是内含子不表达？我不是做细胞的，只是建议您考虑下是否可能是这方面的原因
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2楼2020-01-05 22:12:44
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匿名

用户注销 (职业作家)
本帖仅楼主可见
3楼2020-01-05 22:46:50
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Lillian李

新虫 (小有名气)
感觉还是takara反转靠谱点

发自小木虫Android客户端
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4楼2020-05-20 22:13:17
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