| 查看: 226 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 vince8181 的 1 个金币 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
vince8181木虫 (正式写手)
|
[交流]
关于real time标准曲线的制作
|
||
|
近期想做real time PCR，是关于基因差异表达的，我只需要知道两个样本中目的基因的表达差异就够了，从现在了解的知识是，可以用双标准曲线法和2-ΔΔCt法，但是无论哪种方法都要做标准曲线，后者要验证目的基因和管家基因的扩增效率，只有扩增效率相差不大，才能用这个方法，可是做标准曲线需要制作标准品，好像是质粒，可是我从来没接触过这方面的知识，更别说制作了，我就想知道：可不可以用我的cDNA模版进行梯度稀释分别对目的基因和管家基因进行扩增来做标准曲线？如果不行，还有什么更简便的方法呢？ 另外，相关的耗材我买了axygen的八排管，125排那种，也买了axygen 1000个袋装0.2ml的PCR管（分装试剂和引物），还买了axygen盒装枪头若干及200ul及10ul 袋装枪头各一包，听说Axygen的东西都是RNase，Dnase free的，可网上查了一下，有的人说还是要高压消毒一下比较好，也不知道哪个对，有用过的虫友不吝赐教啊。 [ Last edited by vince8181 on 2009-6-13 at 19:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
284求调剂
已经有12人回复
-
求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分
已经有6人回复
-
289材料与化工（085600）B区求调剂
已经有5人回复
-
B区考研调剂
已经有4人回复
-
0854电子信息求调剂
已经有8人回复
-
292求调剂
已经有3人回复
-
340求调剂
已经有5人回复
-
生物学学硕求调剂
已经有10人回复
-
上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境）
已经有4人回复
-
材料学求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17169.7
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14523
- 在线: 2184.4小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
3楼2009-06-14 12:00:45
sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
- BioEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 贵宾: 0.694
- 金币: 3553.3
- 散金: 150
- 红花: 3
- 帖子: 1479
- 在线: 64小时
- 虫号: 79951
- 注册: 2005-07-12
- 性别: GG
- 专业: 植物分类学
★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):很强大！ 6-13 23:18
vince8181(金币+2,VIP+0): 6-13 23:43
vince8181(金币+1,VIP+0):谢谢你的回复，你是说每次做都要用样品混合物啊，为什么不用单个样品来做标准曲线呢？ 6-13 23:53
amisking(金币+3,VIP+0):很强大！ 6-13 23:18
vince8181(金币+2,VIP+0): 6-13 23:43
vince8181(金币+1,VIP+0):谢谢你的回复，你是说每次做都要用样品混合物啊，为什么不用单个样品来做标准曲线呢？ 6-13 23:53
|
axygen是进口的不需要灭菌 标准曲线通常使用cDNAmix（也可以用标准品），就是你的样品的混合物，然后进行梯度稀释（这个稀释主要看你模板的浓度而定），每次做待测基因都要一起做参考基因（管家基因），尽量做到两者的扩增效率差不多，然后让待测基因和参考基因进行比值（双标准曲线法） |
2楼2009-06-13 23:14:02
