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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 目的基因在质粒上表达，但是整合到基因组上不表达
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zyly605

银虫 (小有名气)

[求助] 目的基因在质粒上表达，但是整合到基因组上不表达 已有1人参与

目的基因通过构建质粒的形式转入谷棒，目的基因表达了，但是将目的基因整合到基因组上，目的基因就不表达了，可能原因是什么？
如：将木糖利用基因通过质粒的形式表达菌株可以利用木糖，但是整合到基因组上，菌株不能利用木糖，可能原因是什么？
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1楼 2020-01-03 20:47:54
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得分两种：一是基因确实不表达，整合到基因组上是带有启动子还是利用基因组上的启动子？整合过程中是否出现错误？二是基因表达了，只是比较低。插入基因组是单拷贝还是多拷贝，一般质粒的拷贝数是很高的，两者之间有多大差距。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zyly605
2楼2020-01-04 08:51:40
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
表达量降低了，不是不表达

发自小木虫Android客户端
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3楼2020-01-04 17:14:14
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zyly605

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 雨独步 at 2020-01-04 08:51:40
我觉得分两种：一是基因确实不表达，整合到基因组上是带有启动子还是利用基因组上的启动子？整合过程中是否出现错误？二是基因表达了，只是比较低。插入基因组是单拷贝还是多拷贝，一般质粒的拷贝数是很高的，两者之 ...

插入到基因组上的目的基因前面添加了启动子，整合结果测序正确；但是你说的第二种情况不确定，如何验证呢
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4楼2020-01-04 19:35:54
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zyly605

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2020-01-04 17:14:14
表达量降低了，不是不表达

我插入了强启动子还是不行，那如何提高表达量呢
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5楼2020-01-04 19:36:29
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zyly605 at 2020-01-04 19:35:54
插入到基因组上的目的基因前面添加了启动子，整合结果测序正确；但是你说的第二种情况不确定，如何验证呢...

这跟你整合到基因组上的方法有关，如果类似同源重组或者CRISPR方法的话，那就是单拷贝，就是你的基因只会整合到基因组上一个确定的位置。
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6楼2020-01-04 20:55:34
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zyly605

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雨独步 at 2020-01-04 20:55:34
这跟你整合到基因组上的方法有关，如果类似同源重组或者CRISPR方法的话，那就是单拷贝，就是你的基因只会整合到基因组上一个确定的位置。...

是单拷贝，我通过同源重组的方法整合了目的基因。但是按照其他文献里同源重组的方法整合了目的基因后可以利用木糖
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7楼2020-01-05 09:13:19
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
多拷贝基因整合

发自小木虫Android客户端
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8楼2020-01-05 09:44:20
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