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youxistar

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近用的in-fusion克隆,菌落PCR出来是阳性条带,送测序全部是载体序列。。。困扰中。片段是切胶回收的,也不大,500bp
21楼2021-02-02 17:42:23
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youxistar

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by lqbzfun at 2020-12-03 11:44:28
1、选择蓝光切胶。
2、不电泳直接回收
3、总之,避免紫外照射,若没法避免,那就试试提高波长、降低强度、缩短切胶时间

您好,请问不电泳怎么能够直接回收呢?
22楼2021-02-02 17:43:34
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

23楼2021-02-02 19:35:34
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要不要我给你试试?

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生物资源交流QQ群:1044518333
24楼2021-02-02 20:15:25
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fengxueren

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议先确认PCR模板是否有问题,引物是否正确

发自小木虫Android客户端
25楼2021-02-18 00:27:08
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wenting8918

木虫 (正式写手)

小硕


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by KM石头 at 2020-01-04 14:22:33
楼主可以考虑换一种大肠杆菌感受态细胞,我构建过一种载体质粒,只有xl_blue好用,其他DH5a,jm109都不好使,楼主可以试试看,可能有用

不知道你是哪种载体要  xl_blue ?
永远幸福,幸福永远
26楼2021-02-20 15:17:06
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by coostudent at 2020-01-03 14:48:36
in-fusion做了几次都失败了,最后转化涂板后在相应抗性环境下都能生长,应该是片段没插进去,最后载体自连,就是搞不懂为什么会自连的这么彻底
质粒10kb左右大小,pcr的话有什么pcr酶推荐么?
多谢答复!...

楼主连上了吗?我之前也总是载体自连,我是用双酶切,后来发现连接酶效率不行了,换了个酶就没问题了

发自小木虫Android客户端
27楼2021-03-20 22:43:14
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xhl1024

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我可以求一个pCRISPomyces-2商业质粒嘛,谢谢楼主!
28楼2021-11-04 15:24:36
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