| 查看: 4122 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
coostudent铜虫 (小有名气)
|
[交流]
2kb片段插入总是失败，搞了半年了，求前辈拯救
|
||
|
2kb片段插入质粒xbaI位点，酶切酶连还有in-fusion的方法都试过了，但是最终挑不到阳性克隆。搞了半年了，感觉就是个简单的酶切酶连操作，但就是搞不定，心累，想哭，求拯救！ 除了质粒，相关的材料都换过了。质粒也对酶切位点周围测了序，没有问题，理论上也不会发生甲基化…… 质粒是链霉菌基因编辑的商业化质粒pCRISPomyces-2 酶切位点XbaI 如需更详细线索 我会在后面补充 或者有做过相关试验的小伙伴吗，求指点！ 多谢！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
MerlingMay» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
coostudent
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 17.7
- 散金: 227
- 红花: 1
- 帖子: 210
- 在线: 98小时
- 虫号: 3518096
- 注册: 2014-11-04
- 专业: 天然有机化学
12楼2020-01-05 10:23:29
ULYSSEESWB
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 7653.9
- 散金: 2508
- 红花: 7
- 帖子: 596
- 在线: 1100.8小时
- 虫号: 939000
- 注册: 2010-01-08
- 专业: 药理学其他科学问题
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:13
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:13
| in-fusion也失败？设置过阳性对照么？载体自连？试试pcr线性化载体 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2020-01-02 13:15:50
3楼2020-01-02 13:29:17
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:22
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:22
| 实在不行试试双酶切吧，我们实验室基本都是双酶切。酶切连接失败我首先会检查扩增片段的引物上是否有相应的酶切位点及保护碱基；其次是质粒上确实具有这两个酶切位点序列（一定要在质粒上搜到相应的序列，有些质粒图谱画的不靠谱）。最后考虑试剂是否过期。祝你好运 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2020-01-02 19:49:06
