| 查看: 3728 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
coostudent铜虫 (小有名气)
|
[交流]
2kb片段插入总是失败，搞了半年了，求前辈拯救
|
||
|
2kb片段插入质粒xbaI位点，酶切酶连还有in-fusion的方法都试过了，但是最终挑不到阳性克隆。搞了半年了，感觉就是个简单的酶切酶连操作，但就是搞不定，心累，想哭，求拯救！ 除了质粒，相关的材料都换过了。质粒也对酶切位点周围测了序，没有问题，理论上也不会发生甲基化…… 质粒是链霉菌基因编辑的商业化质粒pCRISPomyces-2 酶切位点XbaI 如需更详细线索 我会在后面补充 或者有做过相关试验的小伙伴吗，求指点！ 多谢！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
MerlingMay» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有229人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
coostudent
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 17.7
- 散金: 227
- 红花: 1
- 帖子: 210
- 在线: 98小时
- 虫号: 3518096
- 注册: 2014-11-04
- 专业: 天然有机化学
11楼2020-01-05 10:19:29
ULYSSEESWB
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 7653.9
- 散金: 2508
- 红花: 7
- 帖子: 596
- 在线: 1088.7小时
- 虫号: 939000
- 注册: 2010-01-08
- 专业: 药理学其他科学问题
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:13
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:13
| in-fusion也失败？设置过阳性对照么？载体自连？试试pcr线性化载体 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2020-01-02 13:15:50
3楼2020-01-02 13:29:17
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:22
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2020-01-18 20:29:22
| 实在不行试试双酶切吧，我们实验室基本都是双酶切。酶切连接失败我首先会检查扩增片段的引物上是否有相应的酶切位点及保护碱基；其次是质粒上确实具有这两个酶切位点序列（一定要在质粒上搜到相应的序列，有些质粒图谱画的不靠谱）。最后考虑试剂是否过期。祝你好运 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2020-01-02 19:49:06
10