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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：酵母质粒提取不成功
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微生物7839

[交流] 求助：酵母质粒提取不成功

最近用omega酵母质粒小提试剂盒提取酵母质粒，做了三次都不成功。有哪位老师和同学做过质粒提取吗？能否帮忙找找原因，不胜感激。
菌种是Leu选择培养基长出的,按照道理质粒应该转进去了。活化20小时左右，取1-3ml严格按照试剂盒操作的。提取质粒后转化大肠杆菌氨卞板无菌落。
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1楼 2009-06-13 12:54:47
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
友情顶贴！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
2楼2009-06-13 13:14:05
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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找一位做过的师兄或师姐带着做一次，虽然试剂盒附有很详细的说明书，但是实验过程中还是有一些细节可能没注意到。
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Thank-you，so-blue.
3楼2009-06-13 15:25:24
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微生物7839

师兄师姐都不做这方面的，我操作过程已经很认真了。实在是找不到原因，有做过的同学能给些指导吗？
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4楼2009-06-13 16:43:22
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
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我做过酵母质粒抽提的，菌株是从Openbiosystem买的，用的是MN的Kit感觉就按着protocol操作，最后质粒电泳都能看到明显条带的。
我觉得1-3ml太少了，我那时用了差不多10ml（当然跟浓度有关系）
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5楼2009-06-13 20:50:01
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ilaveu

木虫 (著名写手)
★
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我以前用普通碱裂解法提过
不过也是提的不好
有时候有条带，
可是再鉴定发现又不对
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6楼2009-06-13 20:58:46
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
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适度增加菌量，用可靠的试剂盒
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7楼2009-06-13 21:15:27
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
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不用试剂盒也是可以的，用裂壁酶处理后普通碱裂解法可以提出来，一般酵母的质粒比较少，最后要溶解于小体积中
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8楼2009-06-13 22:29:53
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微生物7839

谢谢大家了！我打算增加菌液量到10ml再提一次看看。如果这样的话，是不是裂解酶和后续溶液的量也应该加大呢？
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9楼2009-06-14 12:25:45
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