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微生物7839

[交流] 求助:酵母质粒提取不成功

最近用omega酵母质粒小提试剂盒提取酵母质粒,做了三次都不成功。有哪位老师和同学做过质粒提取吗?能否帮忙找找原因,不胜感激。
菌种是Leu选择培养基长出的,按照道理质粒应该转进去了。活化20小时左右,取1-3ml严格按照试剂盒操作的。提取质粒后转化大肠杆菌氨卞板无菌落。
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

友情顶贴!
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
2楼2009-06-13 13:14:05
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
找一位做过的师兄或师姐带着做一次,虽然试剂盒附有很详细的说明书,但是实验过程中还是有一些细节可能没注意到。
Thank-you,so-blue.
3楼2009-06-13 15:25:24
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微生物7839

师兄师姐都不做这方面的,我操作过程已经很认真了。实在是找不到原因,有做过的同学能给些指导吗?
4楼2009-06-13 16:43:22
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做过酵母质粒抽提的,菌株是从Openbiosystem买的,用的是MN的Kit感觉就按着protocol操作,最后质粒电泳都能看到明显条带的。
我觉得1-3ml太少了,我那时用了差不多10ml(当然跟浓度有关系)
5楼2009-06-13 20:50:01
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ilaveu

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我以前用普通碱裂解法提过
不过也是提的不好
有时候有条带,
可是再鉴定发现又不对
6楼2009-06-13 20:58:46
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
适度增加菌量,用可靠的试剂盒
7楼2009-06-13 21:15:27
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不用试剂盒也是可以的,用裂壁酶处理后普通碱裂解法可以提出来,一般酵母的质粒比较少,最后要溶解于小体积中
8楼2009-06-13 22:29:53
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微生物7839

谢谢大家了!我打算增加菌液量到10ml再提一次看看。如果这样的话,是不是裂解酶和后续溶液的量也应该加大呢?
9楼2009-06-14 12:25:45
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