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微生物7839

[交流] 求助酵母质粒提取失败原因

最近用omega酵母质粒小提试剂盒提取酵母质粒,做了三次都不成功。有哪位老师和同学做过质粒提取吗?能否帮忙找找原因,不胜感激。
菌种是缺Leu选择培养基长出的,按照道理质粒应该转进去了。活化20小时左右,取1-3ml严格按照试剂盒操作的。提取质粒后转化大肠杆菌氨卞板无菌落。
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pidou

木虫 (正式写手)

你的质粒条带没有跑出来你就转化,这样的话怎么能够转化成功呢??
“。怀疑是拷贝数太低,提取的质粒太少,检测不到。”那你就再多拷贝几次啊!!!··
引用回帖:
Originally posted by 微生物7839 at 2009-06-14 15:01:43:
跑过电泳的,10ul点样量,没有条带。怀疑是拷贝数太低,提取的质粒太少,检测不到。所以就转化大肠杆菌了,结果没长出来。楼上的同学最后找到失败的原因了吗?会不会是我取的菌量太少了呢?试剂盒不便宜,不敢随便 ...

5楼2010-03-10 22:24:08
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yuweibest

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也遇到过这种情况!当时也不知道什么原因!但是做到第五次才张!再说你提的质粒跑电泳了吗?确定提出来了吗?
2楼2009-06-14 12:23:02
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ligang418

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在用小提试剂盒时,其中个人觉得有几步还是很重要的,比如沉淀蛋白什么的;在者:如楼上说跑个电泳看看10分钟左右就完了;要么直接上核酸蛋白分析仪;呵呵;实在不行就换个盒子看看。呵呵
3楼2009-06-14 13:45:36
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微生物7839

跑过电泳的,10ul点样量,没有条带。怀疑是拷贝数太低,提取的质粒太少,检测不到。所以就转化大肠杆菌了,结果没长出来。楼上的同学最后找到失败的原因了吗?会不会是我取的菌量太少了呢?试剂盒不便宜,不敢随便换的,呵呵。。。
4楼2009-06-14 15:01:43
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