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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助酵母质粒提取失败原因
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微生物7839

[交流] 求助酵母质粒提取失败原因

最近用omega酵母质粒小提试剂盒提取酵母质粒，做了三次都不成功。有哪位老师和同学做过质粒提取吗？能否帮忙找找原因，不胜感激。
菌种是缺Leu选择培养基长出的,按照道理质粒应该转进去了。活化20小时左右，取1-3ml严格按照试剂盒操作的。提取质粒后转化大肠杆菌氨卞板无菌落。
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1楼 2009-06-13 12:52:16
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yuweibest

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过这种情况!当时也不知道什么原因！但是做到第五次才张！再说你提的质粒跑电泳了吗？确定提出来了吗？
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2楼2009-06-14 12:23:02
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ligang418

金虫 (正式写手)
★
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在用小提试剂盒时，其中个人觉得有几步还是很重要的，比如沉淀蛋白什么的；在者：如楼上说跑个电泳看看10分钟左右就完了；要么直接上核酸蛋白分析仪；呵呵；实在不行就换个盒子看看。呵呵
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3楼2009-06-14 13:45:36
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微生物7839

跑过电泳的，10ul点样量，没有条带。怀疑是拷贝数太低，提取的质粒太少，检测不到。所以就转化大肠杆菌了，结果没长出来。楼上的同学最后找到失败的原因了吗？会不会是我取的菌量太少了呢？试剂盒不便宜，不敢随便换的，呵呵。。。
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4楼2009-06-14 15:01:43
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pidou

木虫 (正式写手)
你的质粒条带没有跑出来你就转化，这样的话怎么能够转化成功呢？？
“。怀疑是拷贝数太低，提取的质粒太少，检测不到。”那你就再多拷贝几次啊！！！··
引用回帖:
Originally posted by 微生物7839 at 2009-06-14 15:01:43:
跑过电泳的，10ul点样量，没有条带。怀疑是拷贝数太低，提取的质粒太少，检测不到。所以就转化大肠杆菌了，结果没长出来。楼上的同学最后找到失败的原因了吗？会不会是我取的菌量太少了呢？试剂盒不便宜，不敢随便 ...

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5楼2010-03-10 22:24:08
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