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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by supergrape at 2020-01-06 13:59:49
为什么是在双抗培养基中过夜培养?
...

我的理解就是单交换筛选出来的菌里面,质粒和细菌共用一段核酸(左右同源臂),这个时候阳性首先得是我们的目的菌株,其次还要有质粒,所以要加双抗。(满足这种条件的除了发生同源重组的,还有质粒转进细菌的可能,这种情况下就要重新做结合转移了)。双交换的时候,蔗糖使质粒停止复制,所以最终得到的只有我们的目的菌株。
培养含有质粒的大肠都会加相应的抗生素,是一样的道理。

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11楼2020-01-06 18:58:13
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supergrape

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-01-06 18:58:13
我的理解就是单交换筛选出来的菌里面,质粒和细菌共用一段核酸(左右同源臂),这个时候阳性首先得是我们的目的菌株,其次还要有质粒,所以要加双抗。(满足这种条件的除了发生同源重组的,还有质粒转进细菌的可能 ...

质粒转移到受体菌后,质粒所携带的复制子类型是大肠杆菌的,所以在受体菌中不起到复制作用,因此我觉得质粒不整合到细菌基因组上是不会双抗板上长的。
我现在把菌体在双抗培养基中培养传代,然后涂20%蔗糖板,用无抗培养基传第二代,再涂20%蔗糖板,看看能不能长。S17含自杀质粒的菌体也在做蔗糖浓度敏感测试中。

发自小木虫Android客户端
12楼2020-01-06 19:35:14
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茶白不是白

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我最近也要做铜绿假单胞菌某一基因敲除,很多不太懂,请问可以和您交流一下吗?
凡是过往,皆为序章
13楼2020-12-02 15:28:48
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