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your2007

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 连续性PAGE和不连续PAGE区别

如题,连续性PAGE和不连续PAGE以及变性和非变性PAGE蛋白胶到底是怎么回事啊,谢谢
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爱人者被爱,敬人者人敬
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


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记得 连续性指凝胶缓冲液与电泳缓冲液的成分一致,非连续指二者成分不同。可能是这样的。
2楼2009-06-13 10:48:52
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生物之渊

铜虫 (小有名气)

SDS加不加是变性和非变性的区别;有没有浓缩胶是连续性PAGE和不连续PAGE的区别
3楼2009-06-13 12:45:32
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hu6704526

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先来谈连续和不连续,二者的区别是浓缩胶的有无,主要作用是浓缩样品成一条线,如果你的加样量很少的话,比如小于5微升的话,浓缩胶加不加差别不大,因为浓缩胶和分离胶的浓度时不一样的,所以是不连续的,连续的就是指只有分离胶,因为浓度都是一样的,所以是连续的。接下来说变形和非变性,除了SDS的有无,还有的区别就是缓冲液的酸度值不一样,这个包括配胶的缓冲液和电极缓冲液,变形的是8.8,非变性的是7.0。它们在对样品的分离上也不同,变性的主要分离变性的蛋白质,非变性的主要分离不能变性的蛋白质,比如需要保留其蛋白活性的蛋白质。
4楼2009-06-13 16:58:26
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-6-13 16:58:
首先来谈连续和不连续,二者的区别是浓缩胶的有无,主要作用是浓缩样品成一条线,如果你的加样量很少的话,比如小于5微升的话,浓缩胶加不加差别不大,因为浓缩胶和分离胶的浓度时不一样的,所以是不连续的,连续 ...

真的很感谢你说的这么详细,再问下就是说我想做非变性PAGE,然后割胶测定酶活力,我需要做多大的体系呢,做胶时不加梳子直接上样,估计1ml左右,做大胶,还是做小体系的小胶呢,恳请指点,谢谢!
爱人者被爱,敬人者人敬
5楼2009-06-13 17:16:49
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hu6704526

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我个人认为你应该去做一个制备的电泳,比如管状电泳,这个上样量大一些。你这个没有必要用大胶,因为你的目的是制备,不是分析。所以不要求很大的分辨率,大胶浪费时间和心情。
6楼2009-06-15 10:56:41
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