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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 酶切
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助 酶切

我的宿主是BL21 载体是pET-3C 为什么我提完的质粒，酶切之后跑电泳就没有条带了？酶切的体系都对，那天我实验室的突然说，BL21 里面有核酸酶，酶切的时候把我的质粒给降解了，可是我提完之后都是质粒，为什么会这样呢！请问大家知道是什么原因吗？
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I am not a hero , but I served with heroes！
1楼 2009-06-12 14:46:39
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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你的质粒是用DDW溶解的还是用含有RNase的DDW溶解的？建议不要用含有RNase的DDW溶解，我曾经用这个溶解我的DNA，结果把基因组DNA降解的一塌糊涂。
你酶切后跑电泳的时候点未酶切的质粒作对照了么？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2009-06-12 15:56:31
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zhyyk10

金虫 (小有名气)
★
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你从阳性克隆里提取的质粒跑电泳了吗？
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相信自己！
2楼2009-06-12 14:59:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
回楼上，国产的RNase买回来后很多要热失活DNase
进口的大多不用
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4楼2009-06-12 16:00:50
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njlf1258

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知你酶切前时候按照说明书要求的酶与底物的量比关系来操作。另外底物的定量是否准确？酶切的时间和温度？
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5楼2009-06-12 16:06:42
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