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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助 酶切

我的宿主是BL21 载体是pET-3C 为什么我提完的质粒,酶切之后跑电泳就没有条带了?酶切的体系都对,那天我实验室的突然说,BL21 里面有核酸酶,酶切的时候把我的质粒给降解了,可是我提完之后都是质粒,为什么会这样呢!请问大家知道是什么原因吗?
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I am not a hero , but I served with heroes!
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njlf1258


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知你酶切前时候按照说明书要求的酶与底物的量比关系来操作。另外底物的定量是否准确?酶切的时间和温度?
5楼2009-06-12 16:06:42
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zhyyk10

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你从阳性克隆里提取的质粒跑电泳了吗?
相信自己!
2楼2009-06-12 14:59:36
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的质粒是用DDW溶解的还是用含有RNase的DDW溶解的?建议不要用含有RNase的DDW溶解,我曾经用这个溶解我的DNA,结果把基因组DNA降解的一塌糊涂。
你酶切后跑电泳的时候点未酶切的质粒作对照了么?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2009-06-12 15:56:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
回楼上,国产的RNase买回来后很多要热失活DNase
进口的大多不用
4楼2009-06-12 16:00:50
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