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新虫 (初入文坛)

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[交流] 求助。最近在构建原核表达质粒上出问题，想请问各位大神已有3人参与

求助。最近在构建原核表达质粒上出问题，想请问各位大神

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我最近在弄这个，将目的片段连接到PET－21d上(酶切位点是Ncol和BamHI)。但是做了几次了，16℃连接过夜后进行转化(DH5α)图板，可平板上(AMP抗性)空空如也，啥也没有。

而且质粒的提取和双酶切都没啥问题。

想试试有没有同学做过这方面的实验，可以分享一下心得吗？

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1楼 2019-12-18 08:27:16

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Song嗯嗯

新虫 (小有名气)

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你好，我最近在做pet-30a的ncoⅠ和bamhⅠ双酶切链接，还没有成功。能问下你双酶切以后的质粒纯化浓度多少吗

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2楼2019-12-22 21:18:27

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xfnfn

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

1楼: Originally posted by (＞0)≠∞ at 2019-12-18 08:27:16
求助。最近在构建原核表达质粒上出问题，想请问各位大神
?
我最近在弄这个，将目的片段连接到PET－21d上(酶切位点是Ncol和BamHI)。但是做了几次了，16℃连接过夜后进行转化(DH5α)图板，可平板上(AMP抗性)空空如也， ...

您好请问您的问题解决了嘛？我现在也出现这种情况，可以分享一下解决办法吗