应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教质粒拷贝数低的问题
51/1返回列表
查看: 1192  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

anik

银虫 (正式写手)

[交流] 请教质粒拷贝数低的问题

做植物转基因方面的，由于表达载体拷贝数过低，在提取质粒时提取出来的量也很少，无法做切胶回收片断。
我的问题是，你们是怎样处理这个问题的？


我用碱法提取，菌液成倍增加，提取的质粒量也没有明显的变化，条带很弱，无法进行下续试验。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-06-11 09:04:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
先提出来，转到大肠杆菌中，再提出来做研究
赞一下 回复此楼
9楼2009-06-11 21:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-11 19:07
你没有说明你的目的，你要是只想要段的话直接PCR扩增出来就可以了。大量提质粒并不是单单增加菌液就可以的，你的体系也需要放大，但是这样一来操作就比较麻烦。最简单的方法就是多做几管，然后抽提浓缩。另外一个麻烦些的方法就是重新克隆到一个克隆载体，这样就能稳定的得到大量的外源片段了。
赞一下(6人) 回复此楼
金币是赌出来的
2楼2009-06-11 09:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得主要是看楼主你抽出的质粒要干什么？
做个PCR应该没有问题的，如果后面有对浓度和纯度高的实验那么建议买个Kit算了，Kit的效率肯定会好很多。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-06-11 09:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2009-6-11 09:21:
你没有说明你的目的，你要是只想要段的话直接PCR扩增出来就可以了。大量提质粒并不是单单增加菌液就可以的，你的体系也需要放大，但是这样一来操作就比较麻烦。最简单的方法就是多做几管，然后抽提浓缩。另外一个 ...

[

呵呵，你讲的这些我都知道。
转基因方面的表达质粒的拷贝数都是比较低的。
十几KB的质粒PCR做什么用呢？

多做几管浓缩，这是个方法。但是目前我的实验条件没有浓缩仪。。。。所以之个头疼的问题啊
赞一下 回复此楼
4楼2009-06-11 14:38:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:40 by oxidpl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变？做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭