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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 双交换问题
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xydlengyue

金虫 (正式写手)

[交流] 双交换问题

最近在做pre112自杀质粒大肠杆菌基因敲除  单交换已经做出来了 pcr2条带 大小也对 现在在10%蔗糖作用下双交换筛选 已经培养了7代了 大概有50%几率出现疑似阳性菌 挑了几十个疑似阳性菌pcr验证结果全是野生型，求大佬指点一下怎么破  就只能一个个筛选  靠工作量选吗  有什么技巧吗  有点难受啊
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1楼2019-12-06 00:53:52
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十方羽

新虫 (初入文坛)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
同学你好，我最近也在用pre112自杀质粒做基因敲除 ，单交换我只能扩出一条带，还有就是蔗糖诱导丢失后的几百个单菌落都有氯霉素抗性，可以给我点建议吗？万分感谢！

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18楼2021-11-12 00:40:30
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liuqiang68

至尊木虫 (文坛精英)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
加油

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5楼2019-12-06 06:20:00
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
做大肠敲除，不用Red系统和CRISPR系统，用SacB系统，效率很低

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9楼2019-12-06 08:43:51
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xydlengyue

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by biosci at 2019-12-06 08:43:51
做大肠敲除，不用Red系统和CRISPR系统，用SacB系统，效率很低

但是已经到了最后一步了..

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10楼2019-12-06 09:00:56
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hikingman8楼
2019-12-06 08:13   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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xiaoshuang16楼
2019-12-06 07:58   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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solarzhao7楼
2019-12-06 08:03   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
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nono20093楼
2019-12-06 02:51   回复  
xydlengyue(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
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