| 查看: 498 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 sungw1984 的 9 个金币 | |||
sungw1984木虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助】新手对于RP-HPLC分离肽的一些疑问？
|
||
|
我最经在做大豆7S蛋白水解物的分离纯化，原本是打算先过凝胶层析再RP-HPLC的，后因为凝胶柱得到样品过少，且时间很紧迫，于是打算水解产物直接上液相，用的是C18的制备柱250*10mm，A相0.1%TFA，B相60%乙腈0.1%TFA，上样2ml，浓度50mg/ml，流速3ml/min，上样后先用10~15分钟的A相把未吸附的样品洗下，然后梯度洗脱：0~60min：0~100%B；60~75min：100%B；75~85min：0~100%A，这是摸索条件时的洗脱方法，但是做了N次，无法得到比较好的分离度，都是一坨一坨出来的，基本没有尖锐的峰且连成片，连着做了2天了，流动相用了N多，却仍然找不到一个好的洗脱条件…… 请问：水解液不经过初步的分离（如凝胶过滤、离子交换等等）直接上液相，理论上能分开吗？如果能，条件改如何优化？如果不能，是否因为成分太复杂，无法达到要求的分辨率？我是个色谱新手，以前基本没怎么做过这方面的实验，所以比较菜…… 另外，每次梯度洗脱后恢复初始条件的时候（0~100%A) 为什么吸收会到负的，就是有个较大的负吸收峰，是因为流动相的吸光值差异引起的吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有5人回复
-
什么是人一生最重要的？
已经有5人回复
-
280求调剂
已经有3人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有8人回复
-
面上可以超过30页吧？
已经有11人回复
-
版面费该交吗
已经有15人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有18人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有10人回复
hfl109
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1125.3
- 散金: 1875
- 红花: 1
- 帖子: 498
- 在线: 140.3小时
- 虫号: 267119
- 注册: 2006-07-22
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
2楼2009-06-11 08:40:28
3楼2009-06-11 08:42:24
sungw1984
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2903.5
- 帖子: 176
- 在线: 19.2小时
- 虫号: 531885
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
4楼2009-06-11 08:44:57
sungw1984
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2903.5
- 帖子: 176
- 在线: 19.2小时
- 虫号: 531885
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
5楼2009-06-11 08:46:38
zhxinyzu
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5803.5
- 散金: 5
- 红花: 2
- 帖子: 535
- 在线: 250小时
- 虫号: 263903
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
6楼2009-06-11 10:34:30
sungw1984
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2903.5
- 帖子: 176
- 在线: 19.2小时
- 虫号: 531885
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
7楼2009-06-11 10:51:11
gm_night
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1343.1
- 帖子: 118
- 在线: 162.6小时
- 虫号: 777697
- 注册: 2009-05-23
- 专业: 应用高分子化学与物理
8楼2009-06-11 11:08:03
sungw1984
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2903.5
- 帖子: 176
- 在线: 19.2小时
- 虫号: 531885
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
9楼2009-06-11 14:45:27
sungw1984
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2903.5
- 帖子: 176
- 在线: 19.2小时
- 虫号: 531885
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
10楼2009-06-12 16:56:26