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crystal8595银虫 (初入文坛)
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求助：鲑鱼精DNA
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偶是新手 ~~~前一段时间做电转化毕赤酵母，一直转不进去。 现在想试试化学转化法，其中的鲑鱼精DNA，比较难买 请问做过这方面的师兄师姐们都是从哪里买的呢？使用的时候有什么注意事项吗？ 小女先在这里谢过了！！ ps：现在实验室只有我一个人做，所以买少量的就ok了~ [ Last edited by amisking on 2010-3-22 at 17:31 ] |
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我最经也想用氯化锂的方法做转化，但是不知道鲑鱼精DNA要怎么处理，看到网页上有一种处理方法，也不是很明白，想请教你一下。 鲑鱼精DNA 说明：生化研究。 CAS＃：9007-49-2 外观：白色线状 特性：Linkage：Formerly listed as Type III 溶解性：溶于水，参考浓度2mg/ml 储存条件：2-8℃ From Sigma D1626 Salmon DNA 的配制： 组份浓度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量约100 ml 配制方法: 1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。 2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl， 使其终浓度为0.1 M。 3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20 次，以切断DNA。 5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。 6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。 7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。 8. 煮沸10分钟后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。 9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。 第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊，我查了很久，都没找到。 还有第五步中的乙醇用的是无水乙醇吗？ 请做过这个实验的大侠指点一下。 |
7楼2010-03-22 17:19:48