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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：鲑鱼精DNA
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crystal8595

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助：鲑鱼精DNA

偶是新手~~~
前一段时间做电转化毕赤酵母，一直转不进去。
现在想试试化学转化法，其中的鲑鱼精DNA，比较难买
请问做过这方面的师兄师姐们都是从哪里买的呢？使用的时候有什么注意事项吗？
小女先在这里谢过了！！

ps：现在实验室只有我一个人做，所以买少量的就ok了~

[ Last edited by amisking on 2010-3-22 at 17:31 ]
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1楼 2009-06-10 15:51:40
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yuweibest

木虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-22 17:32
化学转化毕赤酵母还要用到鲑鱼精DNA？还是将鲑鱼精DNA转化到毕赤酵母里？
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2楼2009-06-10 20:14:26
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yuweibest

木虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-22 17:32
是我孤陋寡闻了！还真用到鲑鱼精DNA，salmon sperm DNA ！张见识了！谢谢
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3楼2009-06-10 20:23:13
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-03-22 17:32
生物公司都有吧，不算贵。

注意配制过程搅拌充分（通过剪切力作用DNA断裂），每次使用前沸水浴10min迅速在冰浴中冷却（保持单链状态）。
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4楼2009-06-10 23:51:56
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
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这个比价好购买，基本生物公司都有卖的。
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52187644
5楼2009-06-11 10:45:12
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sunqx

木虫 (著名写手)
用超声波
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6楼2009-06-12 06:33:02
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bellams

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-03-22 17:32
引用回帖:
Originally posted by crystal8595 at 2009-06-10 15:51:40:
偶是新手~~~
前一段时间做电转化毕赤酵母，一直转不进去。
现在想试试化学转化法，其中的鲑鱼精DNA，比较难买
请问做过这方面的师兄师姐们都是从哪里买的呢？使用的时候有什么注意事项吗？
小女先在这里谢 ...

我最经也想用氯化锂的方法做转化，但是不知道鲑鱼精DNA要怎么处理，看到网页上有一种处理方法，也不是很明白，想请教你一下。
鲑鱼精DNA

说明：生化研究。
CAS＃：9007-49-2
外观：白色线状
特性：Linkage：Formerly listed as Type III
溶解性：溶于水，参考浓度2mg/ml
储存条件：2-8℃
From Sigma D1626
Salmon DNA 的配制：
组份浓度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量约100 ml
配制方法:
1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。
2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，
使其终浓度为0.1 M。
3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20
次，以切断DNA。
5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。
7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8. 煮沸10分钟后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。
9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊，我查了很久，都没找到。
还有第五步中的乙醇用的是无水乙醇吗？
请做过这个实验的大侠指点一下。
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7楼2010-03-22 17:19:48
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