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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] 谁出现过菌液检测条带很亮,但测序的结果说是空质粒,但还有序列测出,但不是

麻烦各位帮个忙,谁出现过菌液检测条带很亮,但测序的结果说是空质粒,但还有序列测出,但不是目的条带,谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-6-10 at 18:09 ]
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你的引物在哪个位置,空载体有时候也可以检测出条带,但是条带的位置和理论上的位置不符,只能说位点上插入的不是你的目的条带,至于插入什么条带,测序之后你可以分析一下,但是,我猜想测序的引物是一端的,这样出序列是正常的,可能是你载体上的序列;所以,t载链接之后,除了要pcr,还要酶切检测(或者用目的基因上的引物等等),之后,没有问题再去测序
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-06-10 14:32:37
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有时候,单菌落被有带空载体的菌落污染,需要重挑单菌落
2楼2009-06-10 14:17:39
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

谢谢各位了!

我的目的片段是1500bp,做出来的大概接近1400bp,克隆后,挑斑时,斑长的既大有圆的,分离也很好,就是一点条带一直不怎么单一,菌液检测时杂带又很少了啊,没有道理啊,空质粒怎么会出现亮的条带啊。
4楼2009-06-10 17:42:09
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
既然是空质粒 怎么会有序列测出呢?
1400BP的产物完全不是你要的序列吗(没有相同的序列)
这个很可能是非特异性的扩增引起的,PCR引物可能设计不好
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
5楼2009-06-10 19:22:58
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