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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] 谁出现过菌液检测条带很亮，但测序的结果说是空质粒，但还有序列测出，但不是

麻烦各位帮个忙，谁出现过菌液检测条带很亮，但测序的结果说是空质粒，但还有序列测出，但不是目的条带，谢谢！

[ Last edited by amisking on 2009-6-10 at 18:09 ]
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1楼 2009-06-10 13:27:06
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
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有时候，单菌落被有带空载体的菌落污染，需要重挑单菌落
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2楼2009-06-10 14:17:39
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
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看你的引物在哪个位置，空载体有时候也可以检测出条带，但是条带的位置和理论上的位置不符，只能说位点上插入的不是你的目的条带，至于插入什么条带，测序之后你可以分析一下，但是，我猜想测序的引物是一端的，这样出序列是正常的，可能是你载体上的序列；所以，t载链接之后，除了要pcr，还要酶切检测（或者用目的基因上的引物等等），之后，没有问题再去测序
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-06-10 14:32:37
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

谢谢各位了！

我的目的片段是1500bp,做出来的大概接近1400bp，克隆后，挑斑时，斑长的既大有圆的，分离也很好，就是一点条带一直不怎么单一，菌液检测时杂带又很少了啊，没有道理啊，空质粒怎么会出现亮的条带啊。
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4楼2009-06-10 17:42:09
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
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既然是空质粒 怎么会有序列测出呢？
1400BP的产物完全不是你要的序列吗（没有相同的序列）
这个很可能是非特异性的扩增引起的，PCR引物可能设计不好
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
5楼2009-06-10 19:22:58
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fyn512045

新虫 (初入文坛)
就是郁闷啊，条带很亮，测序说是空质粒，但他们把序列发过来了，看了基本没有的，我做的就是非特异性扩增啊。
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6楼2009-06-11 14:42:35
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