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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » BSA羧基偶联氨基DNA
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小美666666

新虫 (小有名气)

[交流] BSA羧基偶联氨基DNA已有2人参与

虫子们，有没有做过BSA羧基偶联氨基DNA的？最近做了两个月，还是没有一个很好的结果，说下我的实验条件。参照文献，尝试了两种方法：
1. 向20uLBSA中加入800uLMES（PH=6，EDC 2.8mg，NHS 1.6mg）溶液，振荡15min后，加入800uL 10mM PBS(PH=7.4), 之后进入20uL 10uM氨基DNA，振荡6h后放置到4度冰箱过夜。
2、向20uLBSA中加入800uLPBS（PH=7，EDC 2.8mg，NHS 1.6mg）溶液，振荡15min后，加入20uL 10uM氨基DNA，振荡6h后放置到4度冰箱过夜。
第二天超滤掉游离DNA，对比滤液与原样品紫外吸收，发现这两种方法在260nm处几乎没有下降。说明DNA未偶联成功，请问虫子们问题出在哪里？非常感谢大家的指教。
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1楼2019-11-26 20:17:09
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laraine40

金虫 (小有名气)
★
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你试试看在酸性Buffer中活化羧基，在中性或者弱碱性条件下偶联氨基。
EDC与NHS现配现用。
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2楼2021-08-02 17:11:57
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princeyxx

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by laraine40 at 2021-08-02 17:11:57
你试试看在酸性Buffer中活化羧基，在中性或者弱碱性条件下偶联氨基。
EDC与NHS现配现用。

请问酸性BUFFER中活化后，是直接调节PH，转变成中性或弱碱性，再加入氨基材料吗？
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3楼2025-02-08 17:03:54
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