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小美666666

新虫 (小有名气)

[交流] BSA羧基偶联氨基DNA 已有2人参与

虫子们,有没有做过BSA羧基偶联氨基DNA的?最近做了两个月,还是没有一个很好的结果,说下我的实验条件。参照文献,尝试了两种方法:
1. 向20uLBSA中加入800uLMES(PH=6,EDC 2.8mg,NHS 1.6mg)溶液,振荡15min后,加入800uL 10mM PBS(PH=7.4), 之后进入20uL 10uM氨基DNA,振荡6h后放置到4度冰箱过夜。
2、向20uLBSA中加入800uLPBS(PH=7,EDC 2.8mg,NHS 1.6mg)溶液,振荡15min后,加入20uL 10uM氨基DNA,振荡6h后放置到4度冰箱过夜。
第二天超滤掉游离DNA,对比滤液与原样品紫外吸收,发现这两种方法在260nm处几乎没有下降。说明DNA未偶联成功,请问虫子们问题出在哪里?非常感谢大家的指教。
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laraine40

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你试试看在酸性Buffer中活化羧基,在中性或者弱碱性条件下偶联氨基。
EDC与NHS现配现用。
2楼2021-08-02 17:11:57
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princeyxx

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by laraine40 at 2021-08-02 17:11:57
你试试看在酸性Buffer中活化羧基,在中性或者弱碱性条件下偶联氨基。
EDC与NHS现配现用。

请问酸性BUFFER中活化后,是直接调节PH,转变成中性或弱碱性,再加入氨基材料吗?
3楼2025-02-08 17:03:54
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