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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 我想分离收集一个真菌的次级代谢物，关于HPLC和TLC求助
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huage6078

金虫 (小有名气)

[交流] 我想分离收集一个真菌的次级代谢物，关于HPLC和TLC求助

我想分离收集一个真菌的次级代谢物，我第一次涉及这个方面，
看到有的文献用TLC，有些不是很明白，来请教各位。

我们实验室只有HPLC，是安捷伦的半制备液相，和一台国产的制备液相，
公共实验室还有一台质谱。
就这三样仪器，可以尽可能多的把这个微生物的代谢物分离鉴定出来吗？
1. 我用不同的萃取剂萃取出来的液体，浓缩干燥溶解之后是否能直接上HPLC把他们通过馏分收集的方法给收集出来。
这个方法可行吗？
   是不是不同的流动相，不同的萃取剂，不同的检测波长收集的物质也还是有很大的差别的？
2. TLC的作用是不是让相近的结构的物质跑在一块，为了单独的收集分离。
  减少上HPLC样品中物质的数量？


这个微生物的代谢物很多已经报道出来了，我可以参照有些波长。  关于试验的可行性与方法，内行的朋友给点意见！谢谢了。
实在太困了，不是写的大家能不能看懂，我明天再来。呵呵
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1楼 2009-06-10 01:49:43
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阿德8001

木虫 (小有名气)
★
huage6078(金币+1,VIP+0):xiexie 6-10 10:32
按照文献的处理方法处理。收集可能的峰，作质谱。最好在做个氢谱确定一下。
文献方法无法参考：用乙酸乙酯萃取发酵液。用甲醇或丙酮提取菌丝体，然后把甲醇或丙酮蒸干，乙酸乙酯分液。合并两个乙酸乙酯层。上液相之前最好过一根柱子。还是参考文献，看看人家用什么流动向过正相柱。如果他没有用正向柱，你最好在用HPLC之前再用环己烷（石油醚）/90%甲醇水萃几回，甲醇层过滤膜然后上HPLC。
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2楼2009-06-10 03:22:03
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匿名

用户注销 (文坛精英)
★
huage6078(金币+1,VIP+0):xiexie 6-10 10:32
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3楼2009-06-10 07:38:45
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huage6078

金虫 (小有名气)
谢谢两位啊。
关于代谢物有几大类的。
1.
Anthraquinones
2.
Daucanes
3.
Simple pyrones
4.
Nitrogen heterocyclic compounds
5.
Azaphilones
6.
Harzialactones and derivatives
这些专业名词不会翻译，呵呵。
这些都是一个属的菌产的代谢物。
还有我们实验室只有反相的柱子，国产的制备的液相还没有安装。  
反相柱子和正向的对于分离鉴定和制备影响大吗？
谢谢了
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4楼2009-06-10 11:08:59
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jinzhongchong

木虫 (正式写手)
★
huage6078(金币+1,VIP+0):谢谢 6-10 16:35
粗提物最好是经过常压柱或者中低压柱层析进行粗分离，然后在制备或半制备HPLC纯化精制，这样比直接制备HPLC要节省溶剂和时间。
如果不是针对特定类型的化合物进行分离的话，用ODS色谱柱进行分离就够了，正相HPLC分离色谱制柱很贵，而且色谱用有机溶剂价钱不菲，一般不用。
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5楼2009-06-10 14:43:41
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huage6078

金虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by jinzhongchong at 2009-6-10 14:43:
“粗提物最好是经过常压柱或者中低压柱层析进行粗分离”
在请教一下， 常压柱是什么意思？ 中低压是不是类似于薄层层析啊
谢谢啊
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6楼2009-06-10 16:39:28
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jinzhongchong

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 6-11 00:05
常压柱一般也叫开放柱啦，就是普通的玻璃柱装入填料，加样品，流动相倒入洗脱。整个系统和大气相同，流动相通过重力作用由上往下流。
中低压柱呢就是柱子两端能封闭的，一般填料自己加进去，加样品，流动相是通过泵输如的，因为该系统内有一定的压力，但是相对于HPLC（高压液相）来说，压力不高，因此得名。
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7楼2009-06-10 16:58:48
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huage6078

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jinzhongchong at 2009-6-10 16:58:
常压柱一般也叫开放柱啦，就是普通的玻璃柱装入填料，加样品，流动相倒入洗脱。整个系统和大气相同，流动相通过重力作用由上往下流。
中低压柱呢就是柱子两端能封闭的，一般填料自己加进去，加样品，流动相是通过 ...

谢谢了 ，
不过这个过柱不好收集，可能要按时间收集。
我也不内行。估计操作可行性小的
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8楼2009-06-10 17:34:30
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