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finding1371

银虫 (小有名气)

[交流] 如何确定pcr纯化产物

大家好,我想了解一下就是我的胶回收PCR产物,通过双酶切后电泳检测,怎么能知道我的酶切效果,是否得到了含有酶切位点的片段
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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一般你可以用质粒作为酶切参考
就是切前后的质粒跑电泳
然后以这个作为条件去设置PCR纯化产物的酶切体系
2楼2009-06-09 19:36:31
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bbyu007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反正切完了目的是要连的,直接连,切不开的连不上,连不上的也长不了斑,放心的往下做吧。。。
我是笨笨鱼~~~
3楼2009-06-09 20:47:25
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finding1371

银虫 (小有名气)

我现在就是因为老是连接不上,所以也不知道怎么回事?
4楼2009-06-09 21:09:17
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tim.flhovvke

木虫 (小有名气)

是不是切的问题哦!
tim
5楼2009-06-09 22:44:29
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loveedward

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是建议你先通过A-T连接到T载体上,在提质粒进行双酶切验证。
6楼2009-06-14 17:50:17
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guoab12

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连不上是不是载体和连接片段摩尔比问题?
7楼2009-06-14 18:08:52
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

pcr产物直接连t载体,对连上的载体进行酶切,切出的片段就是切好的目的片段
8楼2009-06-14 19:09:00
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finding1371

银虫 (小有名气)

谢谢各位了,T载体可以连接多大的片段啊
9楼2009-06-14 21:46:22
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