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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何确定pcr纯化产物
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finding1371

银虫 (小有名气)

[交流] 如何确定pcr纯化产物

大家好，我想了解一下就是我的胶回收PCR产物，通过双酶切后电泳检测，怎么能知道我的酶切效果，是否得到了含有酶切位点的片段
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1楼 2009-06-09 19:31:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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一般你可以用质粒作为酶切参考
就是切前后的质粒跑电泳
然后以这个作为条件去设置PCR纯化产物的酶切体系
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2楼2009-06-09 19:36:31
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
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反正切完了目的是要连的，直接连，切不开的连不上，连不上的也长不了斑，放心的往下做吧。。。
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我是笨笨鱼~~~
3楼2009-06-09 20:47:25
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finding1371

银虫 (小有名气)
我现在就是因为老是连接不上，所以也不知道怎么回事?
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4楼2009-06-09 21:09:17
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tim.flhovvke

木虫 (小有名气)
是不是切的问题哦！
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tim
5楼2009-06-09 22:44:29
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loveedward

银虫 (小有名气)
★
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还是建议你先通过A-T连接到T载体上，在提质粒进行双酶切验证。
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6楼2009-06-14 17:50:17
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guoab12

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连不上是不是载体和连接片段摩尔比问题？
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7楼2009-06-14 18:08:52
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
pcr产物直接连t载体，对连上的载体进行酶切，切出的片段就是切好的目的片段
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8楼2009-06-14 19:09:00
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finding1371

银虫 (小有名气)
谢谢各位了，T载体可以连接多大的片段啊
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9楼2009-06-14 21:46:22
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