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wh7690703木虫 (正式写手)
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[交流]
随机突变，目的片段如何与pET-28a连接的多些
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如题，本人想做随机突变，先通过易错PCR，扩增得到随机突变的目的片段，然后双酶切（NdeI和HindIII），之后与用同样的内切酶酶切的pET-28a相连，试了好多次，都无一成功。推测原因可能是目的片段很难双酶切成功。 所以借此宝地，向各位高手请教，您们是如何解决这个难题的！望大虾们不吝赐教。 |
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zhaocy8903
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wh7690703(金币+1,VIP+0):我的NdeI保护碱基加了5个，HindIII加了3个，直接酶切发现很难切断。兄弟，有好的办法吗？ 6-9 22:30
wh7690703(金币+1,VIP+0): 6-9 22:30
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wh7690703(金币+1,VIP+0):NdeI加了5个保护碱基，HindIII加了3个。兄弟，有好的办法吗？ 6-9 22:31
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wh7690703(金币+1,VIP+0):NdeI加了5个保护碱基，HindIII加了3个。兄弟，有好的办法吗？ 6-9 22:31
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双酶切显然是首选，先连到T载体不但要增加操作还可能损失库容量 NdeI需要加入至少6个保护碱基,常用的HindIII也要三个 |
6楼2009-06-09 18:11:48
jdklgjldg
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susizheng
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