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如何在排除缓冲液干扰的前提下测定蛋白是否含金属离子
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| 蛋白存在于缓冲液中（含钠离子），用ICP法测定的是溶液总的元素含量，不能分辨离子（钠离子）是不是来自于蛋白质，如果用透析的办法能完全除去缓冲液中的离子吗，或者冷冻干燥获得蛋白干粉会不会还带有溶液中的离子呢？知识有限，求助大家用什么方法可以只测蛋白里面的金属离子，谢谢各位 |
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2楼2019-11-11 15:36:24
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超滤离心换液本质上跟透析是一样的，都是降低离子浓度。举例来讲，比如你的蛋白体积10ml，钠离子浓度100mM,透析到1Lbuffer中，理论浓度变成1mM，再换液透析至1L buffer 中，浓度降至10uM,再换液……4次换液理论上钠离子浓度稀释了1亿倍（实际可能达不到），含量是极低的，如果仪器的灵敏度很高，这种浓度都能检测到的话，继续透析，直至低于仪器可识别范围。另外，如果蛋白结合钠离子，那么会有一个比例，比如1分子蛋白结合1分子钠离子，那么当透析到一定浓度后，不管再怎么透析，钠离子浓度几乎不再变化，你可以比较不同透析倍数的钠离子浓度也能判断。不推荐超滤离心换液，因为很可能影响蛋白稳定性，发生聚集。分子筛换液也是一种实验室规模常用的方法，脱盐柱就是一种较粗糙的分子筛，你要求高最好使用纯化用的分子筛，用长度高一点的柱子，大分子先出，小分子很晚才出。 |
5楼2019-11-12 12:07:29
6楼2019-11-12 15:05:51