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二久

新虫 (初入文坛)

[交流] 包涵体溶解后根本过滤不下去 已有3人参与

包涵体用8M尿素溶解,离心之后,0.45虑膜根本无法过滤下去,一个虑膜撑死能过滤1ml,而且这样应该丢失的蛋白也很多,都快急死了,有什么好的解决办法吗

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zsygxh

金虫 (小有名气)

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-11-04 19:35:42
溶解加还原剂,pH稍微高一点,然后搅拌溶解时间长一点,甚至最好溶解过夜,溶解体积倍数稍微大一点,应该会有帮助。如果后面不是要过离子柱纯化的话,可以换盐酸胍溶解。除非蛋白性质特殊,一般不会有太大问题。
2楼2019-11-04 17:00:43
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用6M GUA-HCL. 试试.
或者加20mm.dtt,ph9.0

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3楼2019-11-05 21:27:13
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SuYuo

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我遇到同样的问题,解决方法是:
先通过超声,搅拌等方法三充分溶解后,12000rpm离心10min,去除不溶物(理论上溶解了的不会被离心掉)
剩下的溶解离心后的上清再过滤,会相对容易过滤很多。
12
4楼2022-10-20 15:30:22
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