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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体溶解后根本过滤不下去
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二久

新虫 (初入文坛)

[交流] 包涵体溶解后根本过滤不下去 已有3人参与

包涵体用8M尿素溶解，离心之后，0.45虑膜根本无法过滤下去，一个虑膜撑死能过滤1ml，而且这样应该丢失的蛋白也很多，都快急死了，有什么好的解决办法吗

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1楼 2019-11-04 13:43:40
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zsygxh

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版感谢您的关注与支持。 2019-11-04 19:35:42
溶解加还原剂，pH稍微高一点，然后搅拌溶解时间长一点，甚至最好溶解过夜，溶解体积倍数稍微大一点，应该会有帮助。如果后面不是要过离子柱纯化的话，可以换盐酸胍溶解。除非蛋白性质特殊，一般不会有太大问题。
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2楼2019-11-04 17:00:43
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用6M GUA-HCL. 试试.
或者加20mm.dtt,ph9.0

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3楼2019-11-05 21:27:13
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我遇到同样的问题，解决方法是：
先通过超声，搅拌等方法三充分溶解后，12000rpm离心10min，去除不溶物（理论上溶解了的不会被离心掉）
剩下的溶解离心后的上清再过滤，会相对容易过滤很多。
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12
4楼2022-10-20 15:30:22
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