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环氧树脂偶联多肽求助。跪谢!!!
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最近想把一个 10aa的多肽偶联到环氧树脂上,多肽用灭菌水溶解后备用(10mg/ml),偶联缓冲液用0.2M的碳酸盐溶液PH9.2,溶胀0.4g树脂至约3ml 后(Bio-Rad),将多肽5mg加入偶联缓冲液中,20℃,振荡过夜,用甘氨酸封闭活性位点,之后测偶联前后溶液中的多肽含量,方法是测220nm吸光度,结果偶联后与偶联前的结果差别特小,后续试验也没有结果,怀疑多肽就没有偶联上去,请问大家是什么原因,一般偶联的条件是什么?PH对偶联影响大吗,说明书上说pH9-13,我准备用PH10.7也不行,另外偶联缓冲液用哪种缓冲液,不同的缓冲液对偶联有没有影响?一般的注意事项我都知道了,还有什么比较重要的,特殊的注意事项,请大家帮忙?多谢了! 听着挺好做啊,我咋就做不出来呢? |
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