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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 阳离子交换层析洗脱问题
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)

[求助] 阳离子交换层析洗脱问题 已有1人参与

最近使用阳离子交换柱 Fractogel预装柱纯化目的蛋白，使用0-1.5M盐进行阶段性的梯度洗脱，但是在10%，20%，30%，40%，50%梯度下均有出峰，且出峰正常，每个梯度下洗脱到基线然后才切换下一个梯度，最终电泳结果显示各个梯度下洗脱组分中均含有目的蛋白且浓度相当，求教这是怎么回事？难道是目的蛋白与填料的结合位点不同造成洗脱难度的差异所致么，如果目的蛋白与填料结合方式固定，应该在某一个梯度下就能完全洗脱下来，现在在每个梯度下均有很高的出峰，且都是单峰，求赐教！！！！
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1111
1楼 2019-10-18 17:19:25
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zouyoutu

木虫 (正式写手)

可可

【答案】应助回帖

这种情况在疏水作用层析经常发生，在离子交换层析发生也不奇怪。应该是蛋白与离子填料结合的特异性不够，比如除了离子交换作用，还带有疏水作用，建议1更换层析缓冲液条件， 2更换为阴离子交换填料，3其他性质的填料, 4其他基架的填料。
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2楼2019-10-30 16:31:27
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wolfman840

木虫 (正式写手)
这个时候你就可以看一下杂蛋白位置，如果杂蛋白在低盐度下出来，则用预洗脱分离后用步级洗脱目的蛋白。反之则用步级洗脱目的蛋白后，用CIP溶液洗下杂蛋白。

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3楼2019-10-31 08:09:01
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