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Sebastian

银虫 (小有名气)

[交流] 关于hela细胞同步化的问题

自己用thymidine24h+release3h+nocodazole12h的protocol做hela的同步化,初始细胞密度3成左右,做成功了一次(没有用流式来检验,但是镜检几乎所有细胞都变的又圆又亮)后面换l了另外一批的hela,其他条件都一样(可能初始密度会比3成高一点,但是没有到4成,4成是protocol推荐的上限)就再也没有做成功了(做了同步化的和对照的没有任何的区别),会是细胞株的原因吗?

另外我想问一下诸位有经验的虫子:镜检thymidine处理过和没有处理过的细胞有什么区别?我猜测被thymidine处理过的细胞应给被block在S期,所以镜检时所有细胞应该都是贴壁的伸展不规则形状,不会有又圆又亮的M期的形状。不知道对不对?

而不经过thymidine处理直接用nocodazole处理细胞是不是细胞都会死掉?因为我猜测在细胞的其他时相,微管有其他作用,把微管解聚,不在从S-G2-M的细胞应该是活不了的。
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张力民1598

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不懂这个方向,帮你顶一下
3楼2009-06-06 09:52:31
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查看全部 4 个回答

350784478

木虫 (正式写手)

我只能帮你顶一下,希望早日有人解决你的问题。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-06-06 00:10:17
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Sebastian

银虫 (小有名气)

又失败了,同步化和没同步化没有区别,真的不知道怎么回事,看来只能order新的药来试一下了

PS:有没人知道medium里面那些小黑点是不是细胞碎片啊?这个是不是标志着细胞状态不好,如果传代传成这样(指medium中有好多黑点)是不是不推荐冻存啊?

[ Last edited by Sebastian on 2009-6-6 at 11:05 ]
4楼2009-06-06 11:03:19
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