24小时热门版块排行榜    

查看: 510  |  回复: 5
当前主题已经存档。

loveedward

银虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化求助!!急!!!!!!!!!!

我在纯化蛋白的时候需要用到Phenyl FF,平衡液用的是20mmol/L的磷酸盐缓冲液+1.5mol/L的硫酸铵,洗脱液用的是20mmol/L的磷酸盐缓冲液,两个的pH都是7.0。上样前我用透析的方法交换缓冲液,将样品的缓冲液由20mmol/L的磷酸盐缓冲液+一定浓度的(约为0.3mol/L)NaCl,换成20mmol/L的磷酸盐缓冲液+1.5mol/L的硫酸铵,但是交换后却出现了蛋白沉淀,这到底是怎么回事啊?
我在之前做硫胺分级沉淀的时候是收集的硫胺浓度40%以后的蛋白,硫胺浓度为40%的时候是大概为1.7mol/L。为什么现在用1.5mol/L的硫酸铵会出现沉淀啊?请教高手!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:14 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

温度以及其它杂质的存在以及沉淀时间都会影响硫酸铵沉淀的效率
试试1M硫酸铵上样吧,大多数蛋白应该都差不多可以挂柱了
2楼2009-06-05 17:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

puma2003

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
别说用1.5M,可能用1M也照样产生沉淀,原因不明。你硫酸铵沉淀后直接上注不就行了,就算样品和缓冲液的硫酸铵浓度不一致,但吸附与否与这个关系不大吧
3楼2009-06-05 17:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不推荐硫酸铵沉淀后直接上柱,可能的结果有两个
1 挂不上柱子
2 在柱子上发生沉淀
4楼2009-06-05 20:18:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpu2004

金虫 (小有名气)

硫酸铵分级沉淀的浓度是粗糙的,你的浓度和沉淀浓度太接近了
5楼2009-06-05 22:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveedward

银虫 (小有名气)

三楼的大虾:我想请问一下,上Phenyl FF不用进行缓冲液交换吗?我是在交换缓冲液的时候发现出现沉淀的啊!
6楼2009-06-07 19:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveedward 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见