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loveedward

银虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化求助!!急!!!!!!!!!!

我在纯化蛋白的时候需要用到Phenyl FF,平衡液用的是20mmol/L的磷酸盐缓冲液+1.5mol/L的硫酸铵,洗脱液用的是20mmol/L的磷酸盐缓冲液,两个的pH都是7.0。上样前我用透析的方法交换缓冲液,将样品的缓冲液由20mmol/L的磷酸盐缓冲液+一定浓度的(约为0.3mol/L)NaCl,换成20mmol/L的磷酸盐缓冲液+1.5mol/L的硫酸铵,但是交换后却出现了蛋白沉淀,这到底是怎么回事啊?
我在之前做硫胺分级沉淀的时候是收集的硫胺浓度40%以后的蛋白,硫胺浓度为40%的时候是大概为1.7mol/L。为什么现在用1.5mol/L的硫酸铵会出现沉淀啊?请教高手!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:14 ]
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

温度以及其它杂质的存在以及沉淀时间都会影响硫酸铵沉淀的效率
试试1M硫酸铵上样吧,大多数蛋白应该都差不多可以挂柱了
2楼2009-06-05 17:29:28
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
别说用1.5M,可能用1M也照样产生沉淀,原因不明。你硫酸铵沉淀后直接上注不就行了,就算样品和缓冲液的硫酸铵浓度不一致,但吸附与否与这个关系不大吧
3楼2009-06-05 17:32:53
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不推荐硫酸铵沉淀后直接上柱,可能的结果有两个
1 挂不上柱子
2 在柱子上发生沉淀
4楼2009-06-05 20:18:53
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cpu2004

金虫 (小有名气)

硫酸铵分级沉淀的浓度是粗糙的,你的浓度和沉淀浓度太接近了
5楼2009-06-05 22:31:47
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loveedward

银虫 (小有名气)

三楼的大虾:我想请问一下,上Phenyl FF不用进行缓冲液交换吗?我是在交换缓冲液的时候发现出现沉淀的啊!
6楼2009-06-07 19:51:49
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