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wenfuan

[交流] 求助!急需人工呼吸,猪卵母细胞成熟培养问题!急需人工呼吸

本人研究生毕业试验需要做猪卵母细胞成熟培养,但是半年过去了成熟率始终上不来,跪求达人帮助。指点下。
  我们实验室是在用NCSU23+20IU/ml hcg+20IU/ml pmsg +10%PFF做为成熟培养液,48小时检成熟,以出现第一极体为标志。培养条件是38.5摄氏度,饱和湿度,5%二氧化碳。
做了半年成熟率还是超级低!,20%左右吧,跟预期的60%差太远了。。跪求达人指点下啊,愿意拜师有这方面经验的高人!!!!


对了,NCSU23配制中有些物质不容,搅拌好几个小时还是这样,该怎么办啊?

[ Last edited by wenfuan on 2009-6-8 at 18:39 ]
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350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我认识一个人,也是做这方面的,设计内容和你的非常相似,她是做老鼠的卵细胞,你可以查一下相关文献,她那里面还需要加FCS,好像是的,我建议你最好查一下文献,看看别人是怎么做的。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
2楼2009-06-05 14:18:13
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灵笛

新虫 (正式写手)

讨论一下

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-6 12:56
建议你找点外文文献看一下,或者陈大元或者在猪这方面发表过期刊的实验室的人询问一下,最好是不要太大师级的人物,大师只会把握方向,试验都是别人不知名的小人物作的,你的成熟率这么低激素使用量肯定有问题,如果没有猜错的话,你使用的是国产的吧?成熟后扩散怎么样呢?效果好吗?第一是激素的来源,第二是激素的浓度比例,
另外你的培养基建议最好少配一点,配完搅拌后常温过夜(放在超净工作台内防止污染封口可以用烧杯配然后用PE手套套上),这些配方只有实验室有,对外资料国内文献多数有问题,建议看外文文献,
如果还有什么问题可以共同交流-加我为好友,我也是新虫。
虽然调试要一段时间,但建议你换国外生产的激素后看外文使用剂量就能有质的飞跃,一定会令你激动不已的,我也走过你的弯路,但比你快,要学会求助同实验室的人,另外还要看外文相关文献,还要不耐烦的作,才能作出来啊,
3楼2009-06-06 12:53:25
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灵笛

新虫 (正式写手)

声明

我是作绵羊上的,和你有点不同,但是也关注,在猪方面的资料也看了一下的。
国内文献一般只能帮你理清知识,等你清楚了,在看外文文献就能看出很多明堂了
还是国外的比较尊重事实,
不知道你是那个大学的呢?兄台,祝君顺利。
4楼2009-06-06 12:57:54
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wenfuan

我也怀疑是激素的问题,这次换了新买的激素,还是宁波2场的,但是效果同样很垃圾。48小时成熟培养后颗粒细胞扩散的挺好的,就是不出现极体。
5楼2009-06-08 18:33:07
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wenfuan

各位兄台谁给个效果比较好的激素购买渠道,我不想用国产激素了。
还有就是亚牛磺酸100mg一瓶的SIGMA产品只能配置不到200毫升的NCSU23吗?
我都是后加的分装好的亚牛磺酸,这样能节省一些,但是会不会影响使用效果呢?

国产激素实在太垃圾了,我用了20IU/ml,比文献上高了一倍还是没效果!!!
6楼2009-06-08 18:37:46
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