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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 植物材料做chip实验，第一步用甲醛固定，必须要真空吗
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prthefu

木虫 (著名写手)

[求助] 植物材料做chip实验，第一步用甲醛固定，必须要真空吗 已有2人参与

请教各位大神一个问题，植物材料做chip实验，第一步甲醛固定，必须要真空吗？
我查其他资料，如果是拿细胞来做，都是室温固定10min，但如果换成植物材料，为什么要选择真空甲醛固定呢？植物材料有什么特殊性吗？
刚接触chip，还请多指教。
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1楼 2019-10-09 15:17:12
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Yxijaier

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-10-11 14:22:32
好的，你解释的细胞壁原因，我理解了。
但还有个问题，想问一下，如果植物材料在-80℃冻存，做固定的话，就是拿出化冻，然后在固定液中进行操作，固定后终止，水洗后，再进行液氮研磨吗？
我的是植物组织，已经是 ...

可以当成细胞沉淀什么的洗，离心会沉淀到底下
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4楼2019-11-25 11:26:13
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生物二牛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-11-26 17:58:57
这个是由于植物样品有细胞壁，固定液不容易浸透（表现就是植物样品会漂在固定液表面），需要抽掉多余的空气，帮助固定液浸入植物组织（样品沉入固定液底部）
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400-066-8086
2楼2019-10-10 15:36:36
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物二牛 at 2019-10-10 15:36:36
这个是由于植物样品有细胞壁，固定液不容易浸透（表现就是植物样品会漂在固定液表面），需要抽掉多余的空气，帮助固定液浸入植物组织（样品沉入固定液底部）

好的，你解释的细胞壁原因，我理解了。
但还有个问题，想问一下，如果植物材料在-80℃冻存，做固定的话，就是拿出化冻，然后在固定液中进行操作，固定后终止，水洗后，再进行液氮研磨吗？
我的是植物组织，已经是小颗粒状，不太清楚终止后，要怎么水洗。因为不是叶片状，所以还请多指教啊。
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3楼2019-10-11 10:22:32
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atikou

铜虫 (小有名气)
因为植物样本存在细胞壁，正常情况下的甲醛溶液是不能进入细胞壁，导致组蛋白或者转录因子和基因组不能有效的固定。而真空状态下，甲醛能进去，从而实现固定。然后使用终止液后，可以拿PBS溶液清晰以后，用干净的吸水纸吸去多余水分，然后拿锡纸包好，马上液氮冻存。后续就可以用来做实验了。
-----来自易基因的回答

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5楼2021-08-31 18:28:10
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