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prthefu

木虫 (著名写手)

[求助] 植物材料做chip实验,第一步用甲醛固定,必须要真空吗 已有2人参与

请教各位大神一个问题,植物材料做chip实验,第一步甲醛固定,必须要真空吗?
我查其他资料,如果是拿细胞来做,都是室温固定10min,但如果换成植物材料,为什么要选择真空甲醛固定呢?植物材料有什么特殊性吗?
刚接触chip,还请多指教。
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生物二牛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-11-26 17:58:57
这个是由于植物样品有细胞壁,固定液不容易浸透(表现就是植物样品会漂在固定液表面),需要抽掉多余的空气,帮助固定液浸入植物组织(样品沉入固定液底部)
400-066-8086
2楼2019-10-10 15:36:36
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 生物二牛 at 2019-10-10 15:36:36
这个是由于植物样品有细胞壁,固定液不容易浸透(表现就是植物样品会漂在固定液表面),需要抽掉多余的空气,帮助固定液浸入植物组织(样品沉入固定液底部)

好的,你解释的细胞壁原因,我理解了。
但还有个问题,想问一下,如果植物材料在-80℃冻存,做固定的话,就是拿出化冻,然后在固定液中进行操作,固定后终止,水洗后,再进行液氮研磨吗?
我的是植物组织,已经是小颗粒状,不太清楚终止后,要怎么水洗。因为不是叶片状,所以还请多指教啊。
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3楼2019-10-11 10:22:32
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Yxijaier

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-10-11 14:22:32
好的,你解释的细胞壁原因,我理解了。
但还有个问题,想问一下,如果植物材料在-80℃冻存,做固定的话,就是拿出化冻,然后在固定液中进行操作,固定后终止,水洗后,再进行液氮研磨吗?
我的是植物组织,已经是 ...

可以当成细胞沉淀什么的洗,离心会沉淀到底下
提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
4楼2019-11-25 11:26:13
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atikou

铜虫 (小有名气)

因为植物样本存在细胞壁,正常情况下的甲醛溶液是不能进入细胞壁,导致组蛋白或者转录因子和基因组不能有效的固定。而真空状态下,甲醛能进去,从而实现固定。然后使用终止液后,可以拿PBS溶液清晰以后,用干净的吸水纸吸去多余水分,然后拿锡纸包好,马上液氮冻存。后续就可以用来做实验了。
-----来自易基因的回答

发自小木虫Android客户端
5楼2021-08-31 18:28:10
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